组培吧植物藏红花组培快繁技术实例

导读:菊科植物红花(CarthamustinctoriusL.),迄今已有多年的栽培历史。红花作为传统妇科良药在欧洲和亚洲已广泛应用,红花除药用价值外,还是一种天然色素和染料;种子中含有20%~30%的红花油,是一种重要的工业原料及保健用油。红花不仅可以作为传统中药,还可用于功能性食品和保健性化妆品的开发。目前尽管红花作为一种很有前途的经济作物,已得到大面积种植,但是球腐病、叶斑病、根腐病、锈病、疫病、叶枯病、白粉病等病害影响着红花的生产。为获得高产、优质、抗病虫、抗逆性强的油花兼用的品种,可以利用植物组织培养技术,通过对培养条件的调控及高产细胞系的筛选得到再生植株。

1材料与方法

1.1植物名称

红花(CarthamustinctoriusL.)1~2年生菊科植物。

1.2材料类别

种子萌发获得无菌苗的子叶。

1.3培养条件

①愈伤组织诱导培养基:MS+1.0mg/LNAA+2.0mg/LBA十3.0%蔗糖+0.7%琼脂;

②分化培养基:MS+0.2mg/LNAA十2.0mg/LBA+3.0%蔗糖+0.7%琼脂;

③增殖培养基:MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/LBA+0.5%AgNO3,;

④伸长培养基:MS+7.9g/LKN03+1.0mg/LGA,;

⑤生根培养基:1/2MS+2.0mg/LIBA+0.2mg/LBA。

以上培养基pH值在5.8~5.0。培养温度25℃,光照时间16h/d,光照强度lx。

2结果与分析2.1无菌材料的获得

取新疆红花种子粒,流水冲洗,在超净工作台上用酒精浸泡30S,无菌水冲洗3次,再用0.1%升汞溶液消毒10min,用无菌水冲洗5次,无菌水浸泡16h,接种于培养基上。种子接种后36h开始萌发,48h肉眼可见胚轴伸长,培养5d后,子叶完全展开,将子叶四周边缘切掉,使其切割成0.5cm×0.5cm大小,接种于培养基①中,每瓶接种4~5块外植体。

2.2愈伤组织无性系的建立

接种3d后,部分子叶边缘起褶并向上卷起,部分叶片中间隆起;接种5~7d,子叶变化更加明显,边缘开始脱分化;接种8~10d,子叶继续脱分化形成愈伤组织;培养到第45天后,子叶完全脱分化,形成直径为2cm左右的愈伤组织块;60d后愈伤组织绿色加深,增殖速度加快。

2.3不定芽的诱导

将上述绿色愈伤组织切成1cm左右的小块接种到培养基②中,培养28d左右,逐渐出现圆形隆起,形成绿色芽点。继续继代培养10~15d后,出现不定芽,将不定芽转入培养基③中,即可形成大量不定芽,平均21d继代增殖1次。

2.4芽伸长与壮苗培养

不定芽在培养基③中伸长较慢,将其转入培养基④中,培养10d后不定芽开始伸长,培养20d后不定芽明显伸长,伸长率可达%,芽长势良好,继续培养可形成典型成株形态的苗,进而转入生根培养。

2.5生根培养

将苗切成长1~2cm的小苗,接种于培养基⑤中,18d后茎段基部有根原基突起,从根原基长出白色新根,每株生根1条,继代培养1周后,根长可达3~4cm,在主根两侧长出许多侧根。

2.6炼苗移栽

将已生根的苗进行炼苗,移去封口膜,连瓶带苗置于室温,在自然光下放置3~5d;取出试管苗,小心洗净根上附着的琼脂培养基,采用干法移栽模式。先将苗置于通风干燥处风干,然后均匀插入移栽基质(蛭行:珍珠岩=3:1作为基质,经高压灭菌后装入苗钵中),距顶端大约2cm中,覆盖塑料薄膜保湿,用“花无缺”肥料配成水溶液浇灌.逐渐见光,1个多月后可见生长。

3结论

红花组织培养再生植株国内少见报道,国外对于红花通过组织培养途径获得再生植株方面报道也少见。就该实验而言,子叶是用于红花再生较理想的材料。由于细胞具有全能性,外植体比较容易脱分化,所以易于形成愈伤组织.但愈伤组织的分化能力在不同培养基上明显不同。该实验筛选出了适合红花建立再生体系的最佳培养基。

诱导培养基:MS+1.0mg/LNAA+2.0mg/LBA+3.0%蔗糖+0.7%琼脂,

分化培养基:MS+0.2mg/LNAA+2.0mg/LIBA+3.0%蔗糖+0.7%琼脂,

生根培养基:l/2MS+2.0mg/L.IBA+0.2mg/LBA。

通过对红花再生体系建立的研究,不仅可以实现珍贵药用植物的规模化种植;同时还为利用红花作为受体系统开展植物生物反应器的研究奠定了坚实的基础。

编者按:本文来自安徽农业科学,由小编整理发布,如有不妥,敬请告知!

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